Методологија за прикупљање и чување узорака фитопатогених гљивица и оштећених биљака

Прикупљање и складиштење узорака оштећених биљака и гљивица

Узорци биљака са добро дефинисаним знаковима болести и њихови патогени подлијежу сакупљању. Зељасте биљке се убиру у целости, укључујући цвеће, плодове и корење - са дрвећа и грмља - углавном гране са лишћем. Обично се сакупљају делови биљака који имају знакове оштећења у облику плака, пјегавости, јастучићи, отеклина, деформитета, чирева итд., Као и биљке без видљивих знакова паразита, али пресушивање или са наглим мрвљењем лишћа.

Узорци оболелих биљака се узимају од времена клијања до жетве. Предмети фитопатолошких истраживања треба да буду биљке које расту у пољу, башти, повртњаку, ливади и шуми. Такође је неопходно испитати неразвијене парцеле - дјевичанско земљиште, пропасти, мочваре и грмље, јер су многе дивље биљке посредници домаћини и носиоци болести култивираних биљака. У исто време треба проучити презимљене делове биљака - могу се сачувати фазе зимовања (савршени и несавршени) многих патогена који су извор нове инфекције на почетку вегетацијске сезоне..

Зими је пожељно сакупљати погођене делове биљака приликом прегледа вртова, као и продавница поврћа и садница.

Да би се добила полепора из склеротије, неразвијене перитезије, разне строме и других облика гљива, који не формирају споре, заједно са деловима погођених биљака, М. К. Хокхриаков (1969) препоручује њихово постављање у Клебан касете од зиме до зиме. Потоњи су минијатурни компакти, на дрвени оквир на који се вуче мрежа капрона или нехрђајуће жице. Испитни узорак (лишће, стабљика и др.) Се поставља у касету са 2 оквира. Између половина двоструко пресавијеног једнослојног филтрирног папира, заједно са наљепницом написаном на пергаменту једноставном оловком, везана је касета и остављена на површини тла до пролећа. Важно је положити касету тако да је гљива у њој изложена свим природним факторима: влажењу и сушењу, замрзавању и одмрзавању, инсолацији и замрачењу итд..

За презимљавање у природним условима, гљива се поставља у облику чистих култура у епрувете, чије су памучне чепове омотане пергаментним папиром или трагом, на горњем крају затегнуте гумом. У другим случајевима, снопови зељастих биљака остављају се за зимовање, обешавајући их са летвице.

Узорци оболелих биљака одмах након сакупљања смештају се у ботаничку мапу или мрежу и раздвајају један од другог филтером или новинама. Ако се узорци вену, пажљиво се исправљају, а они који се не могу уградити у ботаничку мрежу (гране, гомољи, плодови итд.) Су умотани у папир. Сваки узорак мора бити опремљен налепницом која означава место и датум сакупљања, врсту и сорту биљке, као и назив сакупљача.

Ако су узорци намењени хербаријуму, они се постављају у балирку, претходно одвојену једни од других слојем папира за облагање. Папир који се ослобађа замењује сувим папиром. У случајевима када се узорци не могу сушити (сочно воће, кореновци и сл.), Они се фиксирају у очувању течности. Такве течности су алкохол (70.), формалин (пети), мешавина алкохола с формалином, раствори натријум-хлорида (8-9) или бакар-сулфат (први). Узорци стављени у стаклену посуду преливају се овим течностима..

За дуже чување, постоји неколико рецепата. Најчешћа мешавина бакарног сулфата (ЦуС04-5Х20) - 180 г са убрзаним вапном (ЦаО) - 180 г и воде - 22,7 литара. Бакарни сулфат је растворен преко ноћи у 2 Л воде. Вапна се угаси у 20,7 литара воде и прође кроз танко сито. Ако нема брзог вапна, можете узети 272 г газираног креча Ца (ОХ) 2 и пажљиво сипати раствор бакар-сулфата у млеко вапна. Ово даје најбоље суспендоване седименте. Раствор се користи одмах након припреме..

Кноп решење састављена од калцијум нитрата [Ца (Н03) 2] - 0,5 г, калијум нитрата (КНО3) - 0,125 г, магнезијум сулфата (МгС04-7Х20) - 0,125 г, калијум фосфата (К2ХПО4) - 0,125 г, хлорид хлорида (ФеЦл3 ) 5. - 1 кап и дестилована вода - 1 л.

Главни конзерванс за музејске узорке чине формалдехид (40.) - 25 мл, алкохол (95.) - 150 мл и вода - 1 л.

Да би се очувала зелена боја узорака, они се стављају у врелу мешавину 1 дела ледене сирћетне киселине засићене кристалним бакреним ацетатом и четири дела воде, кључају 1-2 минута док се зелена боја не врати, а затим складиште у 5. раствор формалин.

Друга задовољавајућа метода је стављање материјала у 5. раствор бакарног сулфата на најмање 6 сати и не више од 24 сата. Затим се узорци исперу водом и складиште у раствор сумпорне киселине (5-6302) –2 мл са 1 литром дестиловане воде.

Геслеров конзерванс за обојено воће чине их цинк хлорид (50 г), 40% формалдехид (25 мл), глицерин (25 г) и вода (1 л). За обојене гљиве користе се следеће формулације: ако узорак садржи пигменте нерастворљиве у води - живин ацетат (10 г), глацијална сирћетна киселина (5 мл) и вода (1 л) - у присуству пигмената растворљивих у води - жива ацетат (1 г), неутрални оловни ацетат (10 г), ледена сирћетна киселина (10 мл) и 90% алкохол (1 л) или цинков сулфат (25 г), 40. формалдехид (10 мл) и вода (1 л ).

Да би се избегло испаравање течности, стакленке са фиксним узорцима затворене су млевеним чеповима, а обични чепови се напуне парафином. На сваку теглу је прилепљена налепница..

Микроскопски препарати се припремају са лактофенолом и неколом. Лактофенол са анилин плавом бојом служи као главни конзерванс за трајне препарате који се могу залијепити лаком за нокте (боље је нанијети неколико танких слојева). Први слој мора бити безбојан лак, иначе боја из лака продире у лактофенол. Последњи слој асфалтног лака треба да даје велику снагу. Загревање препарата пре наношења покривача убрзава бојање. Суви прашкасти материјал прво треба навлажити етил ацетатом.

Нецолови препарати се често производе проучавањем гљивица које расту на површини супстрата. Некол или сличан препарат целулозног ацетата разблажује се ацетоном до конзистенције глицерола. Мали кап ове течности стави се на колонију гљивица и осуши се - обично то траје 15-30 минута. Танки безбојни филм формиран са гљивама у њему, након коначног сушења, уклања се скалпелом и поставља између два покривача у чистом глицерину.

Неке гљиве формирају деликатни конидијални апарат. Да би се направили добри препарати користе се стаклене културе. У овом случају је веома важно посматрати услове стерилности и рад се врши под стерилним Петријевим посудама, чија је површина обрисана алкохолом, а сви инструменти, покривачи и тобогани су темељно стерилизирани.

Да би се створили блокови културе на стакленим тобоганима, комад величине 7 мм2 се изрезује из агара у Петријевим посудама, инокулира се минималним бројем спора са сваке стране, прекрива се поклопцем и стави у влажну комору (уређај је описан доле). Када култура достигне зрелост, део спора и носивих структура се причвршћују на клизач и покривају чаше. Блок агар се уклања и препарати се додају додавањем узорака лактофенола са структурама гљивице на стакленим тобоганима и прекривају се поклопцем који је фиксиран. Избегавајте загађивање ваздуха пажљивим загревањем.

Начин употребе покривача предвиђа раст гљивице у њиховом центру. Да бисте то учинили, напуните Петријеву посуду погодним медијумом и оставите да се смрзне. Затим под правим углом направите два дијаметрална уреза агара са опраним скалпелом. Добијени троуглови од агара се подижу и испод сваког од њих са ивица стављају се сагорели поклопци, који се затим замењују. Шалица је окренута и распоред чаша, који се види кроз чашу чаше, је окружен воштаном оловком, а у средини наочала четверокутни одсеци повезани оловком са страницама 6-8 мм. Затим се шоља поново преокреће, непотребни комадићи агара се изрезују и уклоне, док кружни квадрати сјаје кроз агар. Медијум је инокулиран и плоча је смештена у инкубатор. На крају, гљива расте и шири се по отвореној површини сваке чаше, као што се може видети под двогледом. Довољним ширењем гљивице поклопци се уклањају резањем околног агара (оштећење хијефа, ако је потребно) и припрема се на уобичајен начин.

Ако је потребно послати свеже узорке, поступите на следећи начин: одмах након сакупљања они се постављају у такве услове да се не оштете на путу. Стабљике и резнице шаљу се у свежем, благо влажном маховином, плодови се умотају у папир и пребаце струготином итд. Мали узорци шаљу се у папирне кесице. Не можете користити пластични филм за дуготрајно складиштење и пренос узорака, јер кеса таквог материјала ствара пуно влаге и узорци брзо труну..