Медији културе и очување култура фитопатогених патогена

За чисте културе гљива - користе се факултативни сапрофити и факултативни паразити, одржавајући њихову одрживост у сврху даљег проучавања, користе се различити хранљиви медији. Ови медијуми се разликују између чврстих и течних познатих и непознатих хемијских састава, природних и вештачки припремљених. Избор одређене врсте хранљивих супстрата зависи од потреба гљивичног организма и циљева студије. На пример, када се проучава имуност биљака, за процену отпорности биљке домаћина на отровне супстанце патогена и ефекта његовог ослобађања на раст патогених облика, потребно је добити обилну спорулацију.

У току експерименталног рада одабрани су одређени медији. Гљива се сеје истовремено на различитим подлогама у центру Петријеве посуде (у троструком облику) и одржава се на температурама оптималним за њен развој. Посматрања се врше током 12-15 дана над растом и развојем гљиве (енергија раста, почетак и природа спорулације, густина мицелија, итд.), Као резултат, одабире се најприкладнији медијум. Када се користе стандардни синтетички медијуми, њихов састав се може мењати додавањем и искључењем различитих хемијских компоненти.

Често постоји потреба да се пронађу окружења у којима гљива расте и развија се боље него у природи. То се може постићи захваљујући чињеници да се након стерилизације у околини конкурентни микроорганизми уништавају, а његове саставне материје пролазе дубоке биохемијске промене које доприносе бољој апсорпцији неких гљивица. Обично су то агарни медијуми са декоцијама или инфузијама (екстракти) из биљке домаћина или стабљике дјетелине. Дакле, 100 г свежих или 50 г осушених органа који се хране биљкама гљива узимају се у литру воде. Маса се уситни, прокуха један сат, првобитна запремина течности се обнови, филтрира, након чега се дода 2-2,5 агар-агар, раствори и стерилисе (М. К. Хокхриаков, 1969).

Током гајења гљивица које паразитирају на дрвеним биљкама, И. И. Миикевич је користио природне храњиве подлоге припремљене према овом рецепту. Фино сјецкане гране одређених врста дрвећа (200 г) сипају се водом (1 Л) и држе 12 сати на 80 ° Ц, након чега се инфузија филтрира и додаје агар-агар (2,5). Затим је медијум стерилизован током два сата течном паром у Коцховом апарату. У специјалним студијама, екстракти су припремљени из различитих сорти, које су поравнане у концентрацији (1 према сувој материји) узастопним разблаживањем. Могуће је користити слична природна окружења у већој концентрацији.

За одређене систематске групе патогених гљивица, многи истраживачи су одабрали природне хранљиве супстрате и идентификовали подлоге са познатим хемијским саставом. Дакле, експериментално је утврђено да је та врста рода Фусариум добро успевају на куханим пиринчаним зрнима - гљивама рода Пирицулариа развити обилну спорулацију на агарском медијуму са декоцијом зрна пшенице или кореновим културама шаргарепе. Састави чврстих хранљивих материја за поједине врсте и групе гљивица приказани су у табели 20.

Приликом припреме медијума треба имати на уму следеће околности:

1. гљивице обично расту боље у окружењу богатом угљеним хидратима, али гајење на таквим подлогама може дугорочно смањити споралацију-
2. већина гљива преферира благо киселу реакцију (пХ 6,0-6,5), док бактерије више воле неутралну (пХ 7,0) или благо алкалну-
3. угљени хидрати и протеини у киселим и алкалним растворима се приликом загревања уништавају, па их треба умјерено стерилизирати или додавати одвојено-
4. агар се раствара у пола норме воде 1-2 сата, а хранљиве материје у преосталој води, након чега се компоненте мешају-
5. агар се не отврдне у веома киселом или алкалном окружењу-
6. пептон се углавном може изузети из медија за гљиве-
7. прокувану воду треба преферирати дестиловану, јер прва садржи корисне елементе у траговима за гљивице рода Фитофтора боље користите дестиловану воду-
8. за медијуме који садрже биљни материјал прелиминарно се црпи на ниским (агар кромпира) или високим (агар кромпир-декстроза).

У неким случајевима (када се проучавају токсичне секреције патогена, ензима и сл.) Користе се течни хранљиви медијуми. На пример, токсични ефекти секрета Деутеропхома трахеифила проучавано је на медијуму припремљеном инсистирањем на млевеним изданцима биљке домаћина (200 г изданака на 100 цм3 воде). За смути гљиве препоручује се следећа композиција: 0,03 г К2С04 - 0,01 г НХ4НО3 - 10,0 г декстрозе (или малтозе) - 0,01 г ЦаЦл2 - 0,01 г Мга (П04) 2-4Х20 и воде 100 цм3.

За разне студије о биологији гљивица и отпорности биљака, јавља се потреба за дугорочним складиштењем чистих усјева. Међутим, након складиштења, велики број патогених гљивица мења морфолошке и културолошке карактеристике, а понекад губи и патогена својства. Стога, пре спровођења експеримената са гљивицама узетим након дуготрајног складиштења у чистој култури, потребно је обновити њихову патогеност спровођењем пролаза кроз биљку домаћина.

Састав хранљивих материја за узгој фитопатогених гљивица

Широко распрострањен начин одржавања чистих култура гљива је њихово периодично поновно засијавање на свежим хранљивим медијима. Већина усева се сади 2-3 пута годишње. Приликом пресађивања углавном се преносе споре, а у неспорним облицима мицелије са маргиналне зоне колоније.

Поновно сакупљање се врши у два понављања, а 3 копије сваке културе гљива се остављају за складиштење, бројање и поновни поновни унос. Једна од нових поновних препродаја користи се само за будуће ресевање, а друга - за скрининг током експерименталног рада.

За дуготрајно складиштење гљива, боље је користити скробне и целулозне медије без шећера. На стерилном природном материјалу добро се чувају бројне полу-сапрофитне гљиве (на пример, гљиве рода Цитоспора на гранама биљке домаћина) - у овом случају је најприкладнија температура од 4-5 ° Ц. Дубоко хлађење (приближно - 20 ° Ц) задовољава очување одрживости гљива веома дуги период.

Културе гљива се такође могу сачувати под минералним уљем, након лиофилизације (сушењем смрзавањем под сниженим притиском) и под течним азотом у ампулама. Ако гљиве могу издржати потпуну обраду, тада ће бити одрживе 10 и више година. Међутим, за коришћење ових метода је потребна гломазна и скупа опрема..

У нормалним условима, колекцију гљива најбоље је чувати у широким цевима у косом медијуму за раст, затвореним памучним чеповима. Међутим, припазите на оштећења усева крпељима (врста рада) Тироглифус и Тарсонемус), нарочито у јужним пределима и љети у умјереној клими. Налазећи се у епрувети, тиквицама и петријевим јелима, они једу усеве, заразе их бактеријама и контаминирају..

Постоје бројни начини за рјешавање ових гриња. Али, прво, потребно је да се придржавате опште хигијене, предузмете мере да инсекти не улете у лабораторију, будите опрезни при раду са органским материјалом и са земљом. Сав нови материјал мора се пажљиво прегледати по пријему. Ако је могуће, треба да постоје одвојене просторије за чист и прљав материјал..

Довољно густи памучни чепови су обично непропусни за крпеље, а довод ваздуха у културу није поремећен. За већу гаранцију, плуте се могу третирати отровима који штетно делују само на крпеље. Такође се препоручује употреба папирног папира. У ту сврху, након зачепљења обруча чепа, они изгарају у пламену пламеника и прекривају га лепљивим топлим желатинама са бакреним сулфатом (бакар сулфат - 20, желатина - 20, вода - 60). Овај премаз се затим фиксира на крају цеви са папирним папирима. Након сушења вишак папира се сагорева. Такав папир је врло танак са поре који спречавају продирање гриња, пружајући приступ ваздуху. На исти начин флаше можете зачепити, али гумене чепове пре употребе морате уклонити, а папир од папира стерилизовати..

Такође је корисно затворити све тиквице, чаше и епрувете контаминираним материјалом након пријема папира.

Све културе треба да буду нумерисане и регистроване на посебним картицама, на којима се бележи број и име културе, где је и где је додељен, датум додељивања, начин изолације, назив медија који се користе за поновно ресетирање, резултати опажања раста патогена у чистој култури и примећује се карактеристике.